1. Produção de Fatores de Crescimento Recombinantes Humanos (CSFs, VEGFs, PDGFs, TGF-beta1 e 3, FGFs 2 e 9, BMPs) em células de mamífero e de inseto para uso terapêutico no tratamento de injúrias em tecidos moles e duros.

O processo de reparo de injúrias de tecidos envolve três fases: coagulação do sangue e inflamação, proliferação (formação de novos vasos) e remodelamento de tecidos. Pela manipulação da composição de fatores de crescimento, é possível acelerar ou modificar este processo. O uso de fatores de crescimento exógenos tem um efeito benéfico no tratamento de injúrias. Durante a fase inflamatória, neutrófilos e macrófagos são recrutados para produzir dois fatores essenciais, TGF-ß1 (Fator de Crescimento Transformante  Beta-1) e G-CSF (Fator Estimulador de Colônia de Granulócito).  O Fator de Crescimento Derivado de Plaquetas (PDGF) e TGF-ß1 têm um papel crítico no recrutamento de fibroblastos (Fase Proliferativa). O Fator de Crescimento Vascular (VEGF) é essencial para angiogênese. Durante a fase remodelamento, a proliferação epidermal é mediada pelos fatores GM-CSF (Fator Estimulador de Colônia de Granulócito e Macrófagos) e TGF- ß3 (Fator de Crescimento Transformante  Beta-3). O fator GM-CSF aumenta a neovascularização e a formação de tecido granular. Enquanto TGF-ß1 tem um envolvimento direto no desenvolvimento de escaras cutâneas, TGF-ß3 antagoniza seu efeito, evitando o desenvolvimento de escaras em excesso. Em ordem para garantir a correta glicosilação e dobramento das proteínas recombinantes, e para prevenir o desenvolvimento de imunogenicidade em pacientes, nós selecionamos sistemas de expressão em células de mamíferos para a produção de vários fatores de crescimento envolvidos no processo de reparo de injúrias em tecidos moles: G-CSF, GM-CSF, PDGF-BB, TGF-ß1, TGF-ß3, FGF-9, VEGFs, VEGF-C. Para uso em tecidos duros produzimos além de PDGF-BB e VEGFs, BMPs 2, 7  e 4 recombinantes, de interesse na Medicina Ortopédica e Odontologia. Para clonagem dos cDNAs destes genes utilizamos um banco de cDNA humano, desenvolvido e validado em nosso laboratório, obtido a partir de linhagens celulares e tecidos humanos. Diferentes células de mamíferos são transfectadas e clones superprodutores são isolados para caracterização da produção da proteína recombinante e atividade biológica. Os clones selecionados são inicialmente crescidos em cultura aderente e, em seguida, adaptados para crescimento em suspensão, visando o escalonamento do processo. O objetivo maior deste projeto é obter de forma recombinante e segura, em células de mamíferos, os fatores de crescimento para uso terapêutico como biofármaco em diversas doenças e em em cultura de células para Terapia Celular. O projeto também visa a produção destes fatores de crescimento em células de inseto usando o sistema de expressão baculovírus (BEVS), a fim de obter um método de cultivo alternativo e mais econômico para a produção recombinante de alguns desses fatores.

Colaboradores:

VEGFs e FGF-9: Gustavo Gross Belchior (doutorando IQ-USP)
PDGF-BB: Theri Leica Degaki (pós-doutoranda IQ-USP)
BMPs 2 e 7: Erik Halcsik (doutorando IQ-USP) e Fernando Lojudice (pós-doutorando IQ-USP)
BMP4: Paula Sá (Iniciação Científica IQ-USP)
FGF-2: Renato Astorino Filho (pós-doutorandoIQ-USP)
Raquel Santana da Cruz (pesquisadora graduada IQ-USP)

2. Análise do perfil de expressão de microRNAs em diferentes estadios da Endometriose e sua relação com o sistema MMPs/TIMPs/RECK.

A associação entre endometriose não tratada e desenvolvimento do câncer de ovário já foi descrita na literatura. Especula-se que a sobrevivência das células do endométrio no interior da cavidade peritoneal, conferindo maior suscetibilidade a algumas mulheres, pode estar relacionada à expressão alterada de Metaloproteinase (MMP) e inibidores de metaloproteinases (TIMPs). Em câncer, a presença de MMPs está relacionada ao sucesso metastático e suas atividades são reguladas ao nível de transcrição gênica, ativação do precursor por proteólise, inibição de formas ativas de inibidores endógenos e inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMPs e RECK). Neste projeto será analisada a expressão do gene RECK em relação ao sistema MMPs/TIMPS e o perfil dos microRNAs em diferentes estadios da endometriose envolvidos no funcionamento deste sistema.

Colaboradores:

Dr. Maurício Abrão (FM-USP)
Marina Trombetta Lima (doutoranda IQ-USP)